材料与方法 大鼠慢支模型的制备及分组：雄性SD大鼠28 只，体重（220±30） g ，随机分为：（1）慢支模型组（慢支组）：7只，采用气管内注入脂多糖（LPS，200 μg/200 μl,Sigma公司）法制作慢支模型［2］。（2）健康对照组（对照组）： 7只，不做任何 干预，为空白对照。(3)生理盐水处理组（生理盐水组）：7只，按慢支组方法制备动物 模型，从第22天起每天给予超声雾化吸入生理盐水，20 min/d，共7 d。（4）地塞米松处理 组 （地塞米松组）：按慢支组方法制备动物模型，自第22天起每天给予超声雾化吸入地塞米 松(0.2 mg/ml)，20 min/d，共7 d。对各组大鼠进行以下实验：（1）BALF细胞计数及 分类： 各组大鼠于第22、22、28、28天用1％戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉，对左肺组织用10 ml Hanks液分2次灌洗，作白细胞计数分类。（2）肺组织肿瘤坏 死因子α(TNF-α)含量 测定：取右下叶肺组织100 mg，加PBS 1 ml（pH7.4）冰浴下匀浆30 s，离心15 min（4℃ ，10 000 g），取上清液 -70℃保存，采用ELISA法测定TNF-α含量(Endogen公司试剂盒)。（3）细胞甩片的制作及原位杂交：将采集的BALF离心、洗涤，调整细胞浓度至105/ml，制备细胞片。细胞片用4％多 聚 甲醛固定，加蛋白酶K（E.Merck公司） 置37℃恒温箱10 min，洗涤、4％多聚甲醛后固定， 乙 醇梯度脱水，加入含1 μg/ml L-选择素探针（军事医学科学院基础医学研究所沈倍奋教授 惠 赠）的杂交液（50 μl/片，杂交液需煮沸变性5 min），42℃杂交6～18 h，洗涤后3％牛血 清白蛋白BSA封闭 ，加链亲和素胶体金，室温40 min，洗涤、显影、伊红复染，明胶封片镜检。系统阳性对照 为 已知阳性细胞株，系统阴性对照为空白探针杂交液。应用真彩色医学图像分析系统对原位杂 交结果进行相对定量分析，表达强度以平均光密度表示。
表1 各组大鼠BALF白细胞L-选择素表达 、BALF白细胞计数和分类及肺组织TNF-α含量比较(
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