2.长寿家族：对长寿老人的遗传史和一般健康状态进行调查后, 选出7名身体健康、全家愿意合作,且家族两代人中均有寿命大于90岁的老人所在家族定为长寿家族；非长寿家族选同一住宅区、同一民族、工作性质、经济收入与长寿家族成员相似，先证者父母双方寿命小于70岁，家族史中无寿命大于80岁者，其所在家族定为非长寿家族,共9个。长寿家族成员93名，年龄7～100岁，男48名，女45名；非长寿家族成员62名，年龄8～66岁，男30名，女32名。
二、方法
1.apoE基因检测：全部受试者采早晨空腹肘静脉血0.5 ml ACD抗凝，蛋白酶K消化后，酚-氯仿抽提，异丙醇沉淀DNA，75%乙醇漂洗2遍，DNA溶于200 μl TE缓冲液(pH=8.0)中。聚合酶链反应(PCR)引物按Emi等〔5〕 报道设计，位于apoE第4个外显子内，涵盖2个多态位点，由上海植物生理研究所合成，其上游引物序列为5'-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGCTACAC-3'，下游引物序列为5'-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3'，PCR反应体积为50 μl，含10×Buffer 5 μl，4×dNTP 200 μmol/L，引物各25 pmol/L，基因组DNA约0.5 μg及10%二甲基亚酚。首先96℃预变性10分钟，然后加入2 U Taq酶（华美公司提供），按94℃变性40秒，复性61℃ 40秒，延伸71℃ 1分钟，循环30次，最后一个循环72℃延伸5分钟（DNA 扩增仪型号Biorad GenecyclerTM）。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外线透射灯下进行检测，在244 bp处出现荧光带为特异性PCR产物。在PCR扩增产物中加入10 U核酸内切酶 HhaⅠ（美国Promega公司产品），37℃酶切4小时，酶切产物直接加入8%聚丙烯酰胺凝胶中，于200 V恒压下垂直电泳3小时，0.5 μg/ml溴乙啶染色30分钟。紫外线透射灯下观察结果。
2.统计方法：等位基因频率按文献〔6〕方法计算。基因型及等位基因频率比较采用χ2检验。
结 果
一、 PCR 扩增产物和HhaⅠ酶切apoE产物电泳结果
见图1、2。PCR扩增产物位于apoE基因第4外显子内，涵盖2个突变位点，产物长度244 bp。纯合子E2/2在91、83 bp出现荧光条带；E3/3在91、48 bp出现荧光条带；E4/4在72、48 bp出现荧光条带，杂合子E4/2出现91、83、72、48 bp条带；E3/2出现91、83、48 bp条带；E4/3出现91、72、48 bp条带。
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