【Key words】 Lung neoplasms Genes,ras Smoking
最近的分子生物学研究揭示，人类癌症的发生与多种原癌基因活化和抑癌基因失活有关。肺癌的发生与ras基因激活关系最为密切，另外也与一些化学污染物、生活行为、物理因素和机体易感性有关，其中吸烟是公认的诱发肺癌的首要原因。
对吸烟者肺癌中ras基因突变国外有较多的研究，但国内研究较少。我们采用纤维支气管镜(纤支镜)直视下毛刷刷取病灶脱落细胞，并用PCR-RFLP方法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms)检测了33例吸烟肺癌和22例不吸烟肺癌患者支气管上皮脱落细胞中H-ras基因第12密码子的突变情况，以探讨吸烟相关肺癌与H-ras基因突变的内在联系。
对象与方法
一、对象
55例肺癌患者均来自我院1995年8月至1996年12月门诊及住院患者，经细胞或组织病理检查证实为肺癌，年龄60～78岁，平均65.8岁。其中鳞癌26例，腺癌16例，小细胞未分化癌3例，肺透明细胞癌2例，未能分型的非小细胞肺癌(NSCLC)8例。吸烟组33例，男性25例，女性8例；不吸烟组22例，男性16例，女性6例。根据国际抗癌联盟肺癌(TNM)分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期14例。吸烟者吸烟指数均≥400年支。所有患者均经纤支镜检查、取材。
二、实验方法
1.脱落细胞的获得：对受检肺癌患者行常规纤支镜检查，在纤支镜直视下刷取病灶支气管标本，置于无菌生理盐水中送检，同时涂片送病理检查。
2.DNA抽提：脱落细胞离心沉淀弃上清液，加抽提液1 ml混匀，37℃ 1小时，加入蛋白酶K至终浓度为100 mg/L，50℃ 3小时。酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，再加缓冲液TE重溶DNA，4℃保存〔1〕。
3.脱落细胞DNA扩增：以H-ras基因第1外显子为目标进行扩增120 bp，PCR扩增引物上游序列为：5’-AGCGATGACGGAATATAAGCTG-3’，下游序列为：5’-CTCACCTCTATAGTGGGGTCG-3’。 PCR反应液体系共20 μl，94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环。
