帕金森病的发生是由于黑质多巴胺能神经元进行性丧失，导致多巴胺逆轴突转运减少，纹状体多巴胺含量严重下降，临床上以震颤、强直、运动迟缓为主要表现。至今尚无有效的药物能阻止神经元的变性，使病情逆转。近年研究发现脑源性神经营养因子（BDNF）能特异性地促进脑内多巴胺能神经元的存活，保护神经元免受神经毒性的作用，为帕金森病的治疗带来了希望。基因治疗克服了血脑屏障的影响，并可以在脑内很好地表达，发挥治疗效果，为神经退行性疾病的治疗提供了一种有效的治疗方法。我们于1994年10月至1997年4月进行了BDNF基因工程细胞脑内移植的研究，观察其对帕金森病大鼠的治疗作用。
材料与方法
一、 PD大鼠模型制备
参照Ungerstedt〔1〕的方法，雄性SD大鼠200～220 g，鼠龄30天，2%戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉后，黑质致密区定位注射（前囟后5.0 mm, 侧开2.0 mm, 硬膜下7.5 mm）6-羟基多巴胺2 μl /只（2 μg/μl），3天后腹腔内注射阿朴吗啡以诱导大鼠的旋转行为，选取＞10转/分者为帕金森模型成功大鼠，随机分为移植组12只，对照组12只，1周后行细胞移植。
二、方法
1.BDNF基因工程细胞的构建与筛选：将EcoR1酶切下的BDNF cDNA经酶切、补平、去磷酸化，平端连接于双拷贝逆转录病毒载体PN2A，电泳，酶切鉴定为正向连接，电穿孔法转染PA317包装细胞，根据其携带的neo基因采用G418筛选转染阳性克隆，选取高滴度的病毒上清感染成肌细胞L-6TG，G418 400 μg/ml，约2周后筛选出阳性细胞株，命名为BDNF（+）/L-6TG细胞。
2.BDNF（+）/L-6TG细胞BDNF mRNA的表达及生物学活性测定：采用地高辛标记BDNF探针Northern杂交证实转基因细胞内有BDNF mRNA的表达，且基因工程细胞分泌上清能促进PC12突起生长和细胞存活， 证实其具BDNF的体外生物学活性〔2〕。
3.基因工程细胞脑内移植：移植组为BDNF(+)/L-6TG培养融合细胞，胰酶消化后悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS），细胞计数后进行纹状体移植（前囟前1.0 mm, 侧开2.5 mm, 硬膜下4.5 mm），4 μl /只，细胞浓度104/μl；对照组为L-6TG细胞脑内纹状体移植,其他条件不变。
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