一、材料
1. 主要试剂:D-半乳糖、L-葡萄糖、L-赖氨酸、盐酸氨基胍(Aminoguanidine-HCL, AG)、刀豆蛋白(Con A)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、对硝基苯磷酸酯(pNPP)、超氧化物歧化酶(SOD)等均为美国Sigma公司产品,高级糖基化反应终产物(AGE-BSA)标准品、AGE多克隆抗体由美国Picower医学研究中心提供,RPMI 1640为Gibco公司产品,碱性磷酸酶标记羊抗兔IgG为北京中山生物技术公司产品。
2.实验动物与分组:健康雌性C57BL/6J小鼠:由中国医学科学院实验动物中心提供。青年小鼠(3月龄,20~22g)56只,分为7组(1组及3~8组),每组8只。老年小鼠(16月龄,26~28 g)8只。经过1周适应期后给药,其分组为:(1)PBS(sc)组;(2)old+PBS(sc)组;(3)D-半乳糖(50 mg.kg-1.d-1,sc)组;(4)AGE化的D-半乳糖(50 mg.kg-1.d-1,iv)组;(5)L-葡萄糖(50 mg.kg-1.d-1,sc)组;(6)D-半乳糖(50 mg.kg-1.d-1,sc)+AG(0.1%于饮水中) 组;(7)L-赖氨酸(50 mg.kg-1.d-1,sc)组;(8)AG(0.1%于饮水中)组。每天分别给以上药物,60天后处死小鼠,收集血清。
3.白细胞介素2(IL-2)依赖细胞株CTLL-2为本实验室保存。
4.仪器:美国Bio-Rad公司3550型酶联检测仪;XZ-4型小鼠自主活动仪、WX-5型小鼠避暗实验仪为中国医学科学院药物研究所产品;UV-120-02型分光光度计为日本Shimadzu公司产品。
二、方法
1.自主活动试验:将小鼠分别置于XZ-4型自主活动仪的4个暗盒(直径190 mm,高100 mm)中,每盒1只,2分钟适应期后,记录10分钟内小鼠运动次数。以给予PBS的青年鼠运动次数为标准,计为100%,计算其他组小鼠的运动率。
2.避暗试验:给药前10天将小鼠置于WX-5型避暗试验仪明盒内,暗盒通以30 V、50 Hz的电刺激,训练5分钟;10天后将小鼠置于明盒内,记录潜伏时间及5分钟内错误(即进入暗盒)次数。
上一页 1 [2] 3 4 下一页