材料与方法
一、研究对象
1.无肾病并发症的DM2患者73例（DM2组），年龄60～75岁，平均(67.3±6.4)岁，男32例，女41例，病程2～12年，平均(7.4±5.9)年。按WHO标准及尿白蛋白排泄率（UAER）＜20 μg/min确诊〔5〕，均未用ACEI治疗。
2.DM2肾病合并肾功能不全68例（RI组），年龄61～75岁，平均(68.7±6.8)岁，男38例，女30例，病程2～14年，平均(7.9±6.2)年。按WHO糖尿病肾病（DN）诊断标准(半年内3次UAER＞20～200 μg/min)及血清肌酸酐（Scr）确诊〔5，6〕。其中肾功能不全代偿期（Scr男＞106 μmol/L,女＞97 μmol/L,均≤178 μmol/L）36例，氮质血症期（178 μmol/L＜Scr＜445 μmol/L）20例，肾功能衰竭期（Scr≥445 μmol/L）12例；3周内均未服用过ACEI治疗。
3.健康对照组72例（对照组），年龄61～72岁，平均(66.7±5.3)岁，男39例，女33例。经检查均排除糖尿病、高血压、冠心病及肾病，均无糖尿病家族史。
二、实验室方法
1. PCR检测ACE基因多态性:用标准酚-氯仿法由周围血白细胞内提取基因组DNA，以PCR扩增对象的基因组DNA中ACE基因第16内含子I/D多态性， PCR反应引物为正向5' CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3'及反向 5'GATGTGGCCATCACACATTCGTCAGAT3'，
在25 μl的反应体系中包括各10 pmol的引物，2.5 μl的10×buffer，1 mmol/L dNTP 1 μl，1 U Taq酶，模板DNA 0.1 μg〔7〕，在 PCR 自动循环仪上按以下条件进行循环反应：94℃预变性60秒后进入循环，反应条件是94℃变性60秒；58℃退火70秒，72℃延伸80秒；完成35个循环后，在72℃再延伸5分钟，取扩增产物5 μl，加载样缓冲液1 μl，以pBR322/MSPI为Marker,在2％琼脂糖凝胶中进行电泳分析。
2.血清ACE水平测定:采用紫外分光光度法检测，试剂盒由解放军海军总医院提供,灵敏度为0.18 U/L,批内变异系数（CV）5.2%,批间CV值6.7%。
3.其他检查：尿白蛋白测定用放免法（RIA），Scr由自动生化分析仪（CL-7200，Shimanzu）测定，糖化血红蛋白A1c（GHbA1c）用液相色谱法测定（DIAMAT Analyzer，Bia-Rad）。
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