2. 肿瘤移植与传代 在无菌条件下切取患儿肿瘤组织在超净工作台上，将肿瘤组织切成2mm3小块，生理盐水冲洗，用套管针植入BALB/C(nμ/nμ)雄性裸小鼠右前肢皮下,接种工作在标本离体后30min内完成。鼠龄6周，体重18～20g。定期观察移植部位，待肿瘤长至直径1～2cm时，脊椎脱臼法处死裸鼠，用同样方法进行下一轮接种，每代6～40只不等，连续传代。因预实验及进一步实验需要，每代裸鼠数量不等。
3. 肿瘤生长测量 定期观察肿瘤生长情况，记录肿瘤生长的潜伏期和肿瘤生长速度,当肿瘤直径达3mm时，定人每隔1周应用游标卡尺测量肿瘤的最大直径a及横径b，按公式V=π/6×a×b2计算肿瘤体积。用指数函数先计算其生长速率K=(InVt-InV0)/t， 再计算其生长曲线及倍增时间Td=In2/K。
4. 病理组织学观察 处死及自然死亡的实验鼠，解剖并切取肿瘤以观察肿瘤镜下结构及浸润、各脏器转移情况，标本经体积分数为10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察。
5. 电子显微镜观察 肿瘤组织样品用体积分数为2.5%戊二醛磷酸缓冲液固定，7%蔗糖磷酸缓冲液冲洗再固定于体积分数为1%OsO4(锇酸)中，丙酮逐级脱水，环氧树脂812号包埋，超薄切片，枸橼酸铅、醋酸铀双重染色，JEM1200透射电镜观察。
6. 免疫组化标记 采用ABC法进行波形蛋白(vimentin)和上皮膜抗原(EMA)免疫组织化学定位，由肿瘤医院免疫病理室协助完成。一抗浓度：vimentin 1∶500(DAKO公司)， EMA 1∶500(DAKO公司)。
7. 图像分析仪检测DNA含量 肿瘤标本用体积分数为10%福尔马林固定，石蜡包埋，2～3μm切片，HE和Agure染色。采用图像分析仪测定50～100个细胞核，以同张切片间质淋巴细胞核DNA含量均数作二倍体对照，直方图形式打印输出DNA指数(DI)和A区域(G0和G1时相细胞)，B区域(S时相细胞)和C区域(G2和M时相细胞)的百分数。
8. 聚合酶联反应检测WT1基因 取100mg肿瘤组织，酚、氯仿肿瘤组织基因组DNA的抽提。以5'AATGAGACTTACTGGGTGAGG3'，5'TTACACAGTAATTTCAAGCAACGG3'扩增WT1基因3'端短重复序列，PCR条件：于95～100℃水浴中预变性10～15min;变性：90～95℃ 45s; 退火：55～58℃ 45s；延伸：70～72℃ 45s，共35个周期，最后延伸10min，(均为Promega公司产品，操作步骤遵其产品说明)。紫外光检测扩增条带。
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