2.HE染色 标本离体后,质量分数为10%甲醛固定7d,EDTA脱钙30d,常规脱水、石蜡包埋、切片,HE染色,普通光镜观察。
3.组织化学染色 5’-核苷酸酶反应和碱性磷酸酶反应组织化学染色,冰冻切片,体积分数为4%的甲醛固定2min。溶有5mMMgSO4,2mMPb(NO3)2135mM蔗糖和2mMAMP的0.2MTrismaleate(顺丁烯二酸)缓冲液(pH7.2),37℃浸染35min。溶有25mg萘酚AS-BI,50mgFASTRED的0.1Mtris-HCL缓冲液(pH9.2),37℃浸染60min。普通光镜观察。
4.透射电镜观察 标本离体后,分别于矢状面骺边缘、近中心、中心,横断面边缘、近中心、中心切取1.0mm×1.0mm×1.0mm标本,常规清洗、固定、脱水、树脂包埋,半薄切片定位,LKB超薄切片机切片,醋酸双氧铀和枸橼酸铅双重染色,JEM-1200EX透射电镜观察。
结果
大体标本观察:胎儿胫骨近端骨骺是软骨骺,8周时尚无软骨管出现,14周时软骨管数目较少,22周时数目增多,29周时数目最多,发育最完善,呈“枯树枝”样结构(图1),除多从软骨膜长入,向心性走行外,还可见由交叉韧带附着处长入;骺外带粗大而稀疏,近中心密集而分支复杂,中心部位移行为盲端。新生儿次级骨化中心已经形成,直径约3mm,软骨管数目减少,可见一连接干骺端与关节面的交通软骨管。

图1 29周胎儿胫骨近端骨骺,可见发育完善、分支复杂的软骨管,×4
HE染色:软骨管为疏松结缔组织包绕的管状结构,其内血管呈丛状分布。在骺软骨边缘,可见软骨膜向基质呈囊状内折凹陷,顶端存在管腔结构。软骨管内动脉壁厚,似有平滑肌,多位于软骨管的中心部位,伴行静脉腔大壁薄,毛细血管位于软骨管的周边,腔内有红细胞。软骨管终端为毛细血管球。此外,软骨管内还可见一些壁薄不规则的管腔结构,腔内无明显内容物(图2)。
