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中国北方汉族人群支气管哮喘患者β2肾上腺素能受体基因多态性研究

  来源:120online      日期:2007-05-16
中华结核和呼吸感染2000年第2期第23卷论著作者:高光凯 王士雯 张进川单位:高光凯张进川(100853北京,解放军总医院南楼呼吸科);王士雯(老年心血管病研究所)...

  2.PCR扩增:在0.2 ml薄壁反应管中加入10倍稀释之PCR缓冲液2.5 μl,4倍稀释之dNTP 2 μl,上游引物0.5 μl,下游引物0.5 μl,模板DNA 0.5 μl,MgCl2 2 μl,去离子H2O 16 μl。短暂离心混匀后,于95℃加热反应混合液3 min,立即放入冰浴中,每管各加1 U Taq DNA聚合酶。10 000 r/min离心10 s混匀,将反应管置PCR扩增仪上,94℃变性1 min,55℃退火1 min,72℃延伸1 min,共30个循环,最后72℃延伸5 min,自动降至4℃保存。取5 μl上述PCR扩增液与1 μl溴酚兰混匀后,加入预先铺好的含溴化乙靛(EB)的1.5% 琼脂糖凝胶样品孔内,50 V电泳60 min,取下凝胶,在300 nm紫外灯下观察结果(图1~3)。

M为标志物;2,3泳道为精氨酸/甘氨酸杂合子;

  4,5泳道为精氨酸纯合子;6,7泳道为甘氨酸纯合子

1 β2AR 16位点基因多态性电泳结果

M为标志物;2,3泳道为谷氨酰胺/谷氨酸杂合子;

  4,5泳道为谷氨酰胺纯合子;6,7泳道为谷氨酸纯合子

2 β2AR 27位点基因多态性电泳结果

M为标志物;2,3泳道为苏氨酸/异亮氨酸杂合子;

  4,5泳道为苏氨酸纯合子;6,7泳道为异亮氨酸纯合子

3 β2AR 164位点基因多态性电泳结果

  五、统计学处理

  统计学处理均采用SAS数理统计软件包进行。先统计计算各比较组各位点基因型分布频率及等位基因频率,确认其符合Hardy-Weinberg平衡。组间频率比较用χ2检验,连续校正χ2检验,然后计算各组比数比(OR)和95%可信限(CI),并计算各组OR的χ2值,以P<0.05为差异有显著性,P<0.01为差异有极显著意义。

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