1 材料和方法
1.1 动物的选择和分组
纯种健康成年新西兰大白兔10只,体重1.5~2.5kg,雌雄不限,每只兔双前肢造成12mm桡骨-骨膜缺损,自体左右对比,分别植入带血供肌瓣与BMP的复合物(肌瓣组)和单纯BMP(单纯BMP组),BMP植入量根据有关的资料参考,定为5mg/缺损[2]。重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)由军事医学科学院基础医学研究所生物化学研究室提供。
1.2 手术方法
在前肢的前内侧行“S”形切口,长约2.5cm。分离筋膜、肌肉等软组织,暴露桡骨中下段,用牙科台钻螺旋头切除12mm桡骨及其骨膜,造成骨缺损,盐水冲洗局部,清除骨屑。而后以正中动脉的指深屈肌肌支为蒂切取岛状的指深屈肌瓣,形状及大小与缺损相当,并切断进入该肌的神经支。切取后通过隧道转移至桡骨中下段缺损处(肌肉注意严密止血),并将肌肉的两端用丝线固定在桡骨两断端骨膜或软组织上,然后将5mg rhBMP2分远、中、近三点均匀地植入肌瓣中,注意不要破坏肌瓣的血供。植入后肌瓣与骨折面作适当的缝合,注意勿损伤或压迫血管蒂,并使蒂部保持适当的松紧度防止扭转。缝合深筋膜,关闭皮肤切口。适当作外固定,防止岛状肌瓣转移后引起蒂部血管痉挛造成肌瓣的缺血与坏死。1周后可去除外固定,7~10d拆除缝线。同一个体的对侧骨-骨膜缺损处则直接植入5mg rhBMP-2后关闭切口,作为对照。所有实验兔术后均使用抗生素3d。
1.3 检测方法
1.3.1 一般情况 手术后兔于笼中用全价标准兔饲料喂养,观察伤口、食欲、肢体的功能恢复和全身反应情况。
1.3.2 大体标本观察及X线片观察 手术后分别于3周和6周各处死5只动物,行X线摄片及大体观察,截取包括部分宿主骨的缺损区组织1.5cm称湿重。观察标本颜色、质地、血管形成、成骨情况,新生骨组织与宿主骨连接情况。
1.3.3 组织学观察 取材后标本于10%中性福尔马林液中固定48h,置复合脱钙液脱钙24h(视情况可适当延长,至可顺利用针刺入为止),75%酒精固定,常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋,作5um切片,HE染色后光镜观察。
2 结 果
2.1 一般情况
动物术后顺利成活,麻醉清醒后恢复正常食欲。由于外固定,前肢活动稍受限,1周时解除外固定后活动恢复正常,切口均未发生感染、化脓、骨髓炎现象。