2007年02月12日 中华血液学杂志 2006 Vol.27 No.11 P.757-761
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（济南）为了构建多药耐药基因(mdr1)启动子控制的胸苷激酶-胞嘧啶脱氨酶(CD-TK)双自杀基因真核表达载体，研究其对耐药白血病细胞K562/A02的靶向杀伤作用。研究者 利用分子克隆技术构建pcDNA3-mdr1P-CD-TK真核表达载体，脂质体介导法转染K562、K562/A02细胞，通过G418筛选获得稳定转染的细胞株。用PCR、RT-PCR鉴定TK、CD基因的稳定转染与表达，加用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)培养4 d，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率，用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 成功构建了mdr1启动子控制的CD-TK双自杀基因真核表达载体，脂质体成功转染细胞后，经G418筛选获得稳定转染细胞株。PCR结果显示，CD、TK基因均稳定存在于K562、K562/A02细胞中，RT-PCR结果显示K562/A02-CD-TK细胞有CD、TK基因特异性条带表达，而K562-CD-TK细胞无特异性条带。加入GCV、5-FC后，与K562-CD-TK细胞相比，K562/A02-CD-TK细胞存活率明显降低(在60μg/ml GCV和600μg/ml 5-FC联合作用后两种细胞存活率分别为85.04%和41.13%)(P＜0.05)，凋亡率明显升高(同样浓度下分别为2.93%，10.27%)。可见 mdr1启动子驱动的CD-TK双自杀基因系统可以靶向杀伤多药耐药的白血病细胞。
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