②羊水及婴儿血清: 同上,应避免溶血.
③脑组织: 脑组织尸检、活检标本, 加1ml PBS标本缓冲液研磨后,待检。
④眼及
皮肤病灶分泌物:用预测(半干)棉拭子直接取患处分泌物, 置1ml PBS标本缓冲液中送检。
⑤生殖器(宫颈、阴道、外阴、
阴茎)标本:先用消毒棉拭子擦去病变部位表面粘液、污垢,再用预潮棉拭子用力擦拭患处分泌物,置1ml PBS标本缓冲液中送检。
(2)标本处理
①预处理:所有液体标本均可直接进行模板制备;可以取100μl标本液,离心5000 r/ min×5min后,去上清,取沉淀物进行模板制备。
2、PCR扩增
(1)引物设计。以HSV DNA聚合酶的高保守区为检测靶序列以确保特异性。设计3个引物,一个上游共同性引物,DNAP5(5′ATGGTGAAAACATCGACATGTACGG3′):二个下游特异性引物,DNAP3-1(5′CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC3′ )和DNAP3-2(5′CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′),可以分别扩增出HSV-1 469bp DNA片段(1981~2359)、HSV-2 391bp片段(1561~1953):从二型PCR扩增产物中设计了一个不分型的特异性探针HSVP3 5 ‘GGCGTAGTAGGCGGGGATGTCGCG 3‘)。
(1)琼脂糖凝胶电泳染色法:取扩增产物20μl加样品缓冲液4μl混匀后,点样于2%琼脂糖凝胶板,70V电泳15~20min,溴化乙锭(EB)染色5min,于紫外灯下观察结果在溴酚蓝后面有一条或二条亮红带为阳性结果,HSV-2带在前,HSV-1带在后,无带则为阴性结果。
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