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生殖器疱疹<imgsrC/imagEs/tu.gifBDEr0>

  来源:放心医苑      日期:2006-03-22

    2、PCR扩增

    (1)引物设计:选择HSV1糖蛋白D基因为检测靶基因。

    NP-PCR 的引物和探针序列

    “外”引物

    BJHSV1.1

    ATCACGGTAGCCCGGCCGTGTGACA

    19-43

    BJHGV1.2

    CATACCGGAACGCACCACACAA

    218-239

    “内引物”

    BJHSV1.3

    CCATACCGACCACACCGACGA

    51-79

    BJHSV1.4

    CGTAGTTGGTCGTTCGCGCTGAA

    166-188

    探针

    BJHSV-1PRO

    TACGAGGAGGAGCTGTATAACAAAGTCTGT

    96-125

    (2) PCR实验体系和程序:           反应体积为50μl;模板10μl;BJHSV1.1 0.5μl(0.2pmol/L);          BJHSV1.2 0.5μl(0.2pmol/L); 10×缓冲液5μl; 4×dNTP 4μl(4×200mmol/L);DW          27μl; 石蜡油30μl。循环参数为95℃30s; 55℃30s; 72℃60s;          循环20次, 取其扩增产物1μl加入含有BJHSV1.3和BJHSV1.4反应体系中进行套式扩增,          先95℃变性2min,循环参数为95℃30s; 55℃30s; 72℃60s; 循环30次后,72℃延伸5          min;。

    (3) 扩增产物分析:

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